細胞在適應細胞培養基的時候要注意哪些事項

　　細胞培養基既是培養細胞中供給細胞營養和促使細胞生殖增殖的基礎物質，也是培養細胞生長和繁殖的生存環境。無血清培養基不加動物血清，在基礎培養基中加入細胞生長有效因子，激素等。

　　有許多細胞系是相對容易適應無血清培養基和無蛋白培養基的，而對環境變化相對敏感的其它細胞則難以適應變化，這就需要更為專業的方法來讓細胞適應環境變化。

　　而根據細胞系的特性，有兩種方法可使細胞適應無血清培養基。第一種方法是連續適應/循序隔絕法；另一種方法是直接適應。

　　在適應過程中，細胞通常對PH和溫度變化較為敏感。讓細胞在每個階段都至少有一個適應過渡期。

　　細胞存活率和細胞密度

　　細胞在對數生長期中期快速分裂，且在適應過程開始時，存活率大于90%。這一點至關重要。當細胞需傳代時，建議采用1:2或1:3的小傳代比例，以維持更高的細胞密度，同時提供隔絕期間可能有助于細胞的細胞生長因子。

　　當細胞適應新的培養條件時，在增大細胞傳代密度。

　　細胞生長

　　如果在適應過程中，細胞停止了生長，則需讓細胞有更多的時間來適應培養基組合。例如，在方法1的階段4，向無血清培養基添加少量的血清(1-3%)。這樣有助于細胞更容易地適應新的培養基。

　　然后，在幾個過渡期內，緩慢地減少血清量，直至學清量為0。

　　懸浮培養物

　　一些公司的無血清培養基和無蛋白培養基不含血清中所發現的細胞貼壁因子。在一段過渡期內，貼壁細胞將開始離開表面，并成為懸浮細胞系開始生長。細胞也可能因適應而發生形態變化。監測細胞的生長速度，只要細胞能夠與新系統相融合，任何形態變化都不重要。

　　細胞叢

　　在適應于無血清培養期間，細胞容易形成叢。傳代培養時，將叢輕輕折斷，使其分散開。將培養物從靜止細胞培養瓶內轉移到可旋轉錐形瓶內，這樣可能會有助于防止細胞叢的形成。

　　抗生素

　　由于血清蛋白易于粘合到抗生素上，因此，不建議在無血清適應過程中使用抗生素。如不存在血清蛋白，則抗生素水平可能會對細胞產生毒性。

　　預防措施

　　確保在開始適應過程前，儲存有大量原培養基的細胞。如果細胞沒有存活到下一階段，則在整個過程中保存每一階段使用的培養瓶。